?一、操作前安全準(zhǔn)備?

?環(huán)境與防護(hù)?

必須在潔凈環(huán)境（萬(wàn)級(jí)背景下的百級(jí)超凈臺(tái)/無(wú)菌室）操作，提前紫外滅菌≥30分鐘并乙醇擦拭臺(tái)面

操作者需穿戴滅菌服、口罩及手套，手部用75%乙醇消毒后操作

?設(shè)備與耗材檢查?

濾膜選用0.45μm孔徑滅菌濾膜（如混合纖維素酯），過(guò)濾前后確認(rèn)無(wú)破損

強(qiáng)酸/強(qiáng)堿/強(qiáng)腐蝕性樣品禁用，避免損傷儀器管路

?? ?二、樣品處理關(guān)鍵點(diǎn)?

?液體樣品?

供試液高度不超過(guò)過(guò)濾杯最大刻度，避免溢出污染14

含抑菌成分樣品（如抗生素）需添加中和劑（硫乙醇酸鹽）或增加沖洗量至≥100ml

?含顆粒物樣品?

提前去除不溶性顆粒或懸浮物，防止濾膜堵塞

固體樣品需用無(wú)菌稀釋液制成均勻懸浮液

?? ?三、過(guò)濾過(guò)程控制?

?參數(shù)設(shè)置?

真空壓力≤0.03MPa，抽濾速度需穩(wěn)定（進(jìn)液管無(wú)氣泡為宜）

液層高度不足時(shí)，通過(guò)膠帽泵入沖洗液調(diào)節(jié)

?異常處理?

?濾膜無(wú)液層覆蓋?：立即取下膠帽排氣減壓

?過(guò)濾速度驟降?：檢查針頭堵塞或顆粒物殘留，降低轉(zhuǎn)速或預(yù)處理樣品

?? ?四、濾膜轉(zhuǎn)移與培養(yǎng)?

?無(wú)菌操作規(guī)范?

用滅菌鑷子將濾膜菌面朝上貼于培養(yǎng)基，確保無(wú)氣泡

轉(zhuǎn)移過(guò)程≤15秒，減少空氣暴露污染風(fēng)險(xiǎn)8

?培養(yǎng)條件?

細(xì)菌：30-35℃培養(yǎng)3天；真菌：23-28℃培養(yǎng)5天

2025版藥典新增耐藥菌（如洋蔥伯克霍爾德菌）專(zhuān)項(xiàng)檢測(cè)要求

??? ?五、設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)?

?日常維護(hù)?

每次使用后：75%乙醇沖洗濾杯及管路，121℃高壓滅菌20分鐘

每月：乙醇消毒抽氣管道，檢查雙芯針頭空氣過(guò)濾器濾膜干燥度

?定期驗(yàn)證?

新樣品需做方法適用性驗(yàn)證（回收率≥70%）

每季度校準(zhǔn)真空壓力表及溫度傳感器

? ?六、安全警示?

?生物污染風(fēng)險(xiǎn)?

致病菌樣本需在生物安全柜內(nèi)操作，廢棄濾膜需121℃滅菌后再處理

?應(yīng)急措施?

強(qiáng)腐蝕液